Pure Saposhnikovia divaricata olie voor het maken van kaarsen en zeep, groothandel etherische olie voor diffusers, nieuw voor rietbranders.
korte beschrijving:
2.1. Voorbereiding van SDE
De wortelstokken van SD werden als gedroogd kruid gekocht bij Hanherb Co. (Guri, Korea). Het plantmateriaal werd taxonomisch bevestigd door Dr. Go-Ya Choi van het Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Een herbariumexemplaar (nummer 2014 SDE-6) werd gedeponeerd in het Koreaanse Herbarium van Standaard Kruidenbronnen. Gedroogde wortelstokken van SD (320 g) werden tweemaal geëxtraheerd met 70% ethanol (met een reflux van 2 uur) en het extract werd vervolgens onder verlaagde druk geconcentreerd. Het afkooksel werd gefilterd, gevriesdroogd en bewaard bij 4 °C. De opbrengst van het gedroogde extract uit ruw uitgangsmateriaal was 48,13% (w/w).
2.2. Kwantitatieve analyse met behulp van hogedruk-vloeistofchromatografie (HPLC)
Chromatografische analyse werd uitgevoerd met een HPLC-systeem (Waters Co., Milford, MA, VS) en een fotodiode-arraydetector. Voor de HPLC-analyse van SDE werd de primaireO-glucosylcimifugine-standaard werd aangeschaft bij het Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ensec-O-glucosylhamaudol en 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol werd in ons laboratorium geïsoleerd en geïdentificeerd door middel van spectrale analyses, voornamelijk met behulp van NMR en MS.
SDE-monsters (0,1 mg) werden opgelost in 70% ethanol (10 ml). Chromatografische scheiding werd uitgevoerd met een XSelect HSS T3 C18-kolom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, VS). De mobiele fase bestond uit acetonitril (A) en 0,1% azijnzuur in water (B) met een stroomsnelheid van 1,0 ml/min. Er werd een meertraps gradiëntprogramma gebruikt als volgt: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) en 20–65% A (23–40 min). De detectiegolflengte werd gescand tussen 210 en 400 nm en geregistreerd bij 254 nm. Het injectievolume was 10,0μL. Standaardoplossingen voor de bepaling van drie chromonen werden bereid met een eindconcentratie van 7,781 mg/mL (prim-O-glucosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol), en 31,125 mg/ml (sec-O-glucosylhamaudol) in methanol en bewaard bij 4°C.
2.3. Evaluatie van de ontstekingsremmende activiteitIn vitro
2.3.1. Celkweek en monsterbehandeling
RAW 264.7-cellen werden verkregen van de American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, VS) en gekweekt in DMEM-medium met 1% antibiotica en 5,5% FBS. De cellen werden geïncubeerd in een bevochtigde atmosfeer met 5% CO2 bij 37 °C. Om de cellen te stimuleren, werd het medium vervangen door vers DMEM-medium en lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, VS) in een concentratie van 1μg/mL werd toegevoegd in aanwezigheid of afwezigheid van SDE (200 of 400μg/ml) gedurende nog eens 24 uur.
2.3.2. Bepaling van stikstofmonoxide (NO), prostaglandine E2 (PGE2), tumornecrosefactor-α(TNF-α), en de productie van interleukine-6 (IL-6).
Cellen werden behandeld met SDE en gedurende 24 uur gestimuleerd met LPS. De NO-productie werd geanalyseerd door nitriet te meten met behulp van het Griess-reagens volgens een eerder onderzoek [12]. Afscheiding van de inflammatoire cytokinen PGE2, TNF-αIL-6 werd bepaald met behulp van een ELISA-kit (R&D systems) volgens de instructies van de fabrikant. De effecten van SDE op de NO- en cytokineproductie werden bepaald bij 540 nm of 450 nm met behulp van een Wallac EnVision.™microplaatlezer (PerkinElmer).
2.4. Evaluatie van de anti-artrose-activiteitIn Vivo
2.4.1. Dieren
Mannelijke Sprague-Dawley ratten (7 weken oud) werden gekocht bij Samtako Inc. (Osan, Korea) en gehuisvest onder gecontroleerde omstandigheden met een 12-uurs licht/donkercyclus bij°C en% luchtvochtigheid. Ratten kregen laboratoriumvoer en water.ad libitumAlle experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van de National Institutes of Health (NIH) en goedgekeurd door de Animal Care and Use Committee van de Daejeon Universiteit (Daejeon, Republiek Korea).
2.4.2. Inductie van artrose met MIA bij ratten
De dieren werden willekeurig verdeeld over de behandelingsgroepen voordat het onderzoek van start ging (per groep). MIA-oplossing (3 mg/50μEen oplossing van 0,9% zoutoplossing werd rechtstreeks in de intra-articulaire ruimte van de rechterknie geïnjecteerd onder anesthesie, geïnduceerd met een mengsel van ketamine en xylazine. Ratten werden willekeurig verdeeld over vier groepen: (1) de zoutoplossinggroep zonder MIA-injectie, (2) de MIA-groep met MIA-injectie, (3) de met SDE behandelde groep (200 mg/kg) met MIA-injectie, en (4) de met indomethacine (IM) behandelde groep (2 mg/kg) met MIA-injectie. Ratten kregen oraal SDE en IM toegediend, 1 week vóór de MIA-injectie, gedurende 4 weken. De dosering van SDE en IM die in deze studie werd gebruikt, was gebaseerd op die welke in eerdere studies werden toegepast.10,13,14].
2.4.3. Metingen van de gewichtsverdeling van de achterpoten
Na inductie van artrose werd het oorspronkelijke evenwicht in het draagvermogen van de achterpoten verstoord. Een incapacitatietester (Linton Instrumentation, Norfolk, VK) werd gebruikt om veranderingen in de tolerantie voor gewichtsbelasting te evalueren. Ratten werden voorzichtig in de meetkamer geplaatst. De kracht die door de achterpoten werd uitgeoefend, werd gemiddeld over een periode van 3 seconden. De gewichtsverdelingsverhouding werd berekend met de volgende formule: [gewicht op rechter achterpoot/(gewicht op rechter achterpoot + gewicht op linker achterpoot)] × 100 [15].
2.4.4. Metingen van serumcytokineniveaus
De bloedmonsters werden gedurende 10 minuten bij 4°C gecentrifugeerd met een centrifugale kracht van 1500 g; vervolgens werd het serum verzameld en tot gebruik bewaard bij -70°C. De IL-1-niveaus werden bepaald.βIL-6, TNF-αDe concentraties van PGE2 en PGE2 in het serum werden gemeten met behulp van ELISA-kits van R&D Systems (Minneapolis, MN, VS) volgens de instructies van de fabrikant.
2.4.5. Real-time kwantitatieve RT-PCR-analyse
Totale RNA werd geëxtraheerd uit kniegewrichtweefsel met behulp van het TRI-reagens® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS), omgezet in cDNA door middel van reverse transcriptie en vervolgens geamplificeerd met PCR met behulp van een TM One Step RT PCR-kit met SYBR green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, VS). Real-time kwantitatieve PCR werd uitgevoerd met behulp van het Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-systeem (Applied Biosystems, Grand Island, NY, VS). De primersequenties en de probesequentie zijn weergegeven in de tabel.1Aliquots van de cDNA-monsters en een gelijke hoeveelheid GAPDH-cDNA werden geamplificeerd met de TaqMan® Universal PCR mastermix met DNA-polymerase volgens de instructies van de fabrikant (Applied Biosystems, Foster, CA, VS). De PCR-condities waren 2 min bij 50 °C, 10 min bij 94 °C, 15 s bij 95 °C en 1 min bij 60 °C gedurende 40 cycli. De concentratie van het doelgen werd bepaald met behulp van de vergelijkende Ct-methode (drempelcyclusnummer op het kruispunt tussen de amplificatiegrafiek en de drempelwaarde), volgens de instructies van de fabrikant.
Osteoartrose (OA) is de meest voorkomende aandoening van het bewegingsapparaat en de meest voorkomende degeneratieve gewrichtsaandoening bij ouderen.1OA is een aandoening die deels wordt veroorzaakt door letsel, verlies van kraakbeenstructuur en -functie, en ontregeling van pro-inflammatoire en anti-inflammatoire processen.2,3Het tast voornamelijk het gewrichtskraakbeen en het subchondrale bot van synoviale gewrichten aan en leidt tot gewrichtsfalen, met pijn tot gevolg bij belasting, waaronder lopen en staan.4].
Er bestaat geen genezing voor artrose, omdat het erg moeilijk is om het kraakbeen te herstellen als het eenmaal beschadigd is.5De doelen van de behandeling zijn het verlichten van pijn, het behouden of verbeteren van de gewrichtsmobiliteit, het versterken van de gewrichten en het minimaliseren van de invaliderende effecten van de ziekte. Farmacologische behandelingen van artrose zijn erop gericht de pijn te verminderen om de gewrichtsfunctie en de kwaliteit van leven van de patiënt te verbeteren. Hoewel kraakbeenafbraak de belangrijkste gebeurtenis is bij artrose, is de afbraak van collageen de fundamentele factor die de onomkeerbare progressie van artrose in samenhang met ontsteking bepaalt.6,7Behandelingen met ontstekingsremmende en chondroprotectieve eigenschappen zullen naar verwachting de pijn verlichten en de matrixintegriteit behouden bij patiënten met artrose.
Het verminderen van ontstekingen zal daarom waarschijnlijk gunstig zijn voor de behandeling van artrose. Recente studies suggereren dat kruiden een beschermende rol spelen bij de progressie van artrose, door de ontsteking van chondrocyten en verdere kraakbeenafbraak te verminderen. Dit komt doordat ze inwerken op gewrichtsweefsel, wat resulteert in een vermindering van gewrichtspijn.8].
De wortel vanSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) wordt in de traditionele geneeskunde in Korea en China al lange tijd gebruikt voor de behandeling van hoofdpijn, pijn, ontstekingen en artritis.9,10]. De diverse farmacologische effecten vanSaposhnikovia divaricata(SD) omvatten ook ontstekingsremmende, pijnstillende, koortsverlagende en anti-artritische eigenschappen [9,11Uit een recent onderzoek is gebleken dat SD-chromoonextract mogelijk antireumatische effecten heeft in een muizenmodel van collageen-geïnduceerde artritis.10]; er zijn echter weinig studies uitgevoerd die de ontstekingsremmende en anti-artritische werking vanSaposhnikovia divaricataextract (SDE).
Daarom onderzocht deze studie de ontstekingsremmende en anti-artrose-activiteiten van een 70% ethanol-extract van SD. Allereerst werd het ontstekingsremmende effect van SDE geëvalueerd.in vitroin LPS-geïnduceerde RAW 264.7-cellen. Vervolgens werd het anti-artrose-effect van SDE gemeten door de gewichtsverdeling, de afbraak van het gewrichtskraakbeen en de ontstekingsreacties te beoordelen in een ratmodel van door mononatriumjodoacetaat (MIA) geïnduceerde artrose.