Pure Saposhnikovia divaricata-olie voor het maken van kaarsen en zeep, groothandel in diffusers, nieuwe etherische olie voor rietbranders

korte omschrijving:

 

2.1. Voorbereiding van SDE

De wortelstokken van SD werden als gedroogd kruid gekocht bij Hanherb Co. (Guri, Korea). De plantenmaterialen werden taxonomisch bevestigd door Dr. Go-Ya Choi van het Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). Een proefexemplaar (nummer 2014 SDE-6) werd gedeponeerd in het Korean Herbarium of Standard Herbal Resources. Gedroogde wortelstokken van SD (320 g) werden tweemaal geëxtraheerd met 70% ethanol (met een refluxtijd van 2 uur) en het extract werd vervolgens geconcentreerd onder verminderde druk. Het afkooksel werd gefiltreerd, gevriesdroogd en bewaard bij 4 °C. De opbrengst aan gedroogd extract uit ruwe grondstoffen was 48,13% (w/w).

 

2.2. Kwantitatieve hogeprestatievloeistofchromatografie (HPLC)-analyse

Chromatografische analyse werd uitgevoerd met een HPLC-systeem (Waters Co., Milford, MA, VS) en een fotodiode-arraydetector. Voor de HPLC-analyse van SDE werd de primaireO-glucosylcimifugin standaard werd gekocht van het Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ensec-O-glucosylhamaudol en 4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol werden in ons laboratorium geïsoleerd en geïdentificeerd door middel van spectrale analyses, voornamelijk door middel van NMR en MS.

SDE-monsters (0,1 mg) werden opgelost in 70% ethanol (10 ml). Chromatografische scheiding werd uitgevoerd met een XSelect HSS T3 C18-kolom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, VS). De mobiele fase bestond uit acetonitril (A) en 0,1% azijnzuur in water (B) met een stroomsnelheid van 1,0 ml/min. Er werd een meerstapsgradiëntprogramma gebruikt, als volgt: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min) en 20-65% A (23-40 min). De detectiegolflengte werd gescand op 210-400 nm en geregistreerd op 254 nm. Het injectievolume was 10,0μL. Standaardoplossingen voor de bepaling van drie chromonen werden bereid in een uiteindelijke concentratie van 7,781 mg/ml (primairO-glucosylcimifugin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisamminol) en 31,125 mg/ml (sec-O-glucosylhamaudol) in methanol en bewaard bij 4°C.

2.3. Evaluatie van de ontstekingsremmende activiteitIn vitro

2.3.1. Celkweek en monsterbehandeling

RAW 264.7-cellen werden verkregen van de American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, VS) en gekweekt in DMEM-medium met 1% antibiotica en 5,5% FBS. De cellen werden geïncubeerd in een vochtige atmosfeer met 5% CO2 bij 37 °C. Om de cellen te stimuleren, werd het medium vervangen door vers DMEM-medium en lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, VS) bij 1μg/ml werd toegevoegd in aanwezigheid of afwezigheid van SDE (200 of 400μg/mL) gedurende nog eens 24 uur.

2.3.2. Bepaling van stikstofoxide (NO), prostaglandine E2 (PGE2), tumornecrosefactor-α(TNF-α), en de productie van interleukine-6 ​​(IL-6)

Cellen werden behandeld met SDE en gestimuleerd met LPS gedurende 24 uur. De NO-productie werd geanalyseerd door nitriet te meten met behulp van het Griess-reagens volgens een eerder onderzoek [12]. Secretie van de ontstekingscytokinen PGE2, TNF-α, en IL-6 werd bepaald met een ELISA-kit (R&D-systemen) volgens de instructies van de fabrikant. De effecten van SDE op de NO- en cytokineproductie werden bepaald bij 540 nm of 450 nm met behulp van een Wallac EnVision.™microplate-lezer (PerkinElmer).

2.4. Evaluatie van de anti-osteoartritisactiviteitIn vivo

2.4.1. Dieren

Mannelijke Sprague-Dawley-ratten (7 weken oud) werden gekocht van Samtako Inc. (Osan, Korea) en gehuisvest onder gecontroleerde omstandigheden met een licht/donkercyclus van 12 uur.°C en% vochtigheid. Ratten kregen een laboratoriumdieet en waternaar eigen goeddunkenAlle experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van de National Institutes of Health (NIH) en goedgekeurd door de Animal Care and Use Committee van de Universiteit van Daejeon (Daejeon, Republiek Korea).

2.4.2. Inductie van OA met MIA bij ratten

De dieren werden gerandomiseerd en toegewezen aan behandelingsgroepen vóór aanvang van het onderzoek (per groep). MIA-oplossing (3 mg/50μEen 0,9% zoutoplossing werd direct in de intra-articulaire ruimte van de rechterknie geïnjecteerd onder anesthesie geïnduceerd met een mengsel van ketamine en xylazine. Ratten werden willekeurig verdeeld in vier groepen: (1) de zoutoplossinggroep zonder MIA-injectie, (2) de MIA-groep met MIA-injectie, (3) de met SDE behandelde groep (200 mg/kg) met MIA-injectie, en (4) de met indomethacine (IM) behandelde groep (2 mg/kg) met MIA-injectie. Ratten kregen oraal SDE en IM toegediend 1 week vóór de MIA-injectie gedurende 4 weken. De dosering van SDE en IM die in deze studie werd gebruikt, was gebaseerd op die welke in eerdere studies werd gebruikt [10,13,14].

2.4.3. Metingen van de achterpootgewichtverdeling

Na de inductie van OA was de oorspronkelijke balans in het draagvermogen van de achterpoten verstoord. Een incapacitantietester (Linton Instrumentation, Norfolk, VK) werd gebruikt om veranderingen in de draagkracht te evalueren. Ratten werden voorzichtig in de meetkamer geplaatst. De door de achterpoot uitgeoefende draagkracht werd gemiddeld over een periode van 3 seconden. De gewichtsverdeling werd berekend met de volgende vergelijking: [gewicht op rechterachterpoot / (gewicht op rechterachterpoot + gewicht op linkerachterpoot)] × 100 [15].

2.4.4. Metingen van serumcytokineniveaus

De bloedmonsters werden 10 minuten gecentrifugeerd bij 1500 g en 4 °C; vervolgens werd het serum verzameld en bewaard bij -70 °C tot gebruik. De IL-1-niveausβ, IL-6, TNF-αen PGE2 in het serum werden gemeten met behulp van ELISA-kits van R&D Systems (Minneapolis, MN, VS) volgens de instructies van de fabrikant.

2.4.5. Real-time kwantitatieve RT-PCR-analyse

Totaal RNA werd geëxtraheerd uit kniegewrichtsweefsel met behulp van TRI Reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS), omgezet in cDNA en PCR-geamplificeerd met behulp van een TM One Step RT PCR-kit met SYBR Green (Applied Biosystems, Grand Island, NY, VS). Real-time kwantitatieve PCR werd uitgevoerd met behulp van het Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-systeem (Applied Biosystems, Grand Island, NY, VS). De primersequenties en de probesequentie worden weergegeven in tabel 1.1Aliquots van monster-cDNA's en een gelijke hoeveelheid GAPDH-cDNA werden geamplificeerd met het TaqMan® Universal PCR-mastermengsel met DNA-polymerase volgens de instructies van de fabrikant (Applied Biosystems, Foster, CA, VS). De PCR-omstandigheden waren 2 minuten bij 50 °C, 10 minuten bij 94 °C, 15 seconden bij 95 °C en 1 minuut bij 60 °C gedurende 40 cycli. De concentratie van het doelgen werd bepaald met behulp van de vergelijkende Ct-methode (drempelcyclusnummer op het kruispunt tussen amplificatieplot en drempelwaarde), volgens de instructies van de fabrikant.

FOB-prijs:US $0,5 - 9.999 / stuk

Minimale bestelhoeveelheid:100 stuks

Leveringsvermogen:10000 stuks per maand